关键词：AAV-CremRNAAAV9AAV8-TBG-CreAdipoq-CreAAV-LungX
慢性疼痛影响着全球约30%的人口，其机制复杂、治疗困难。背根神经节（DRG）是痛觉信号传入的第一站，其中的神经炎症—特别是免疫细胞与神经元之间的相互作用—在疼痛的持续和加剧中扮演关键角色。尽管巨噬细胞与神经元互作的研究已取得诸多进展，但中性粒细胞在其中的作用仍不清楚。 2026年6月1日，空军军医大学王亚周、解柔刚团队在 Cell Reports在线发表题为 “Nociceptive neurons inhibit neutrophil extracellular trap formation via MLKL-licensed histone release” 的研究论文，首次揭示：痛觉神经元中组成性表达的MLKL蛋白作为“核开关”，正常时结合组蛋白H3限制其释放；在炎症疼痛条件下，MLKL转出细胞核，组蛋白H3释放到胞外，通过TLR4/P2X7受体诱导中性粒细胞外陷阱（NET）形成和神经元超兴奋性，从而参与痛觉敏化。这一发现为慢性疼痛的外周治疗提供了全新靶点。 
研究团队首先在福尔马林（CFA）诱导的炎症疼痛模型中发现，背根神经节（DRG）中MLKL蛋白在正常条件下表达在痛觉神经元的细胞核内。Mlkl全身敲除或痛觉神经元特异性敲除均导致小鼠出现显著的机械痛觉和热痛觉敏化，同时DRG神经元兴奋性明显升高，且未检测到细胞死亡改变。这表明痛觉神经元中的MLKL以一种不依赖细胞坏死的方式调控疼痛阈值。 图1. Mlkl敲除导致炎性痛痛阈降低·主要研究结果·
1、痛觉神经元中的MLKL负向调控疼痛阈值
免疫组化显示，正常状态下超过90%的MLKL位于DRG神经元核内；而CFA刺激后， MLKL迅速转位至细胞质。使用核输出抑制剂Leptomycin B将MLKL束缚在核内，可显著缓解疼痛。通过AAV在Mlkl敲除小鼠DRG中重新表达核定位的MLKL片段（MLKL196-472aa）能够恢复疼痛阈值，而表达胞质定位的突变体（MLKLquad-K→A）则无效。这些结果证明，MLKL的核内定位是其发挥镇痛功能的必要条件。 图2. 胞核MLKL参与痛阈调节 蛋白质组学分析显示，在Mlkl敲除小鼠的DRG中，NET相关通路显著富集。Western blot和免疫组化进一步证实，无论是Mlkl全敲还是痛觉神经元特异性敲除小鼠，其DRG中NET的标志物MPO、Ly6G和citH3均显著升高。为验证NET是否直接参与痛觉过敏，研究团队采用抗Ly6G抗体清除中性粒细胞，或使用DNase I降解NET中的胞外DNA。两种干预均能显著降低DRG中NET标志物的水平，并同时缓解机械痛觉敏化和热痛觉敏化。在Mlkl敲除小鼠DRG中重新过表达MLKL可以抑制NET形成和挽救小鼠的痛觉敏化。这些结果证明，MLKL缺失所引发的NET形成是导致痛觉过敏的关键生物学过程。 图3. NET参与Mlkl敲除小鼠的痛觉超敏2、炎性痛触发MLKL核质转位，核内定位是其调控疼痛的关键
3、DRG中Mlkl缺失导致中性粒细胞胞外陷阱（NET）形成，后者参与痛觉过敏
IP-MS分析发现，在正常状态下，DRG中MLKL与组蛋白H3结合，而炎性痛时结合减少，组蛋白H3释放到细胞外。Mlkl敲除小鼠的DRG神经元培养上清中组蛋白H3水平显著升高，将重组H3蛋白直接注射到野生型小鼠的DRG中，会诱发NET形成、神经元超兴奋和疼痛敏化，而注射H3中和抗体可挽救上述表型。进一步的研究表明，胞外组蛋白H3一方面作用于神经元上的P2X7受体，提高神经元的兴奋性；另一方面作用于中性粒细胞上的TLR4，促进NET的形成。综上，MLKL-组蛋白H3-NET轴构介导了痛觉神经元与中性粒细胞之间的互作，为慢性疼痛的外周治疗提供了可干预的新靶点。 图4. 组蛋白H3释放介导Mlkl缺陷导致的NET形成及痛觉超敏总结4、MLKL在核内束缚组蛋白H3防止其释放，胞外H3经TLR4和P2X7受体诱导NET形成与神经元超兴奋性
综上，本发现不仅提出了MLKL执行非坏死的新功能，更揭示了外周DRG中的“神经元-中性粒细胞”互作在慢性疼痛中的作用。基于中和组蛋白、降解NET或靶向TLR4/P2X7的药物研发，有望为慢性炎症疼痛患者提供新的外周镇痛方案。 空军军医大学基础医学院王亚周教授和解柔刚副教授为论文的通讯作者，博士生孟瀚、八年制博士生胡文超、博士后康恩铭、八年制博士生徐晴为共同第一作者。研究得到国家自然科学基金、陕西省杰青等项目的资助。团队已就相关靶点授权国际发明专利一项。作者感谢武胜昔教授、牛丽娜教授的大力支持和帮助，以及易旭阳硕士在动物行为方面的帮助。
和元生物有幸为研究者提供实验中用的质粒、AAV载体，以实际行动助力神经科学研究 和元助力
参考文献 Meng H, Hu W, Kang E, Xu Q, Wang P, Yi X, Mao H, Zhang B, Meng X, Wang Y, Tan Y, Mao Z, Zheng X, Niu L, Shi M, Luo C, Wu S, Xie R, Wang Y. Nociceptive neurons inhibit neutrophil extracellular trap formation via MLKL-licensed histone release. Cell Rep. 2026 Jun 1;45(6):117457. doi: 10.1016/j.celrep.2026.117457. Epub ahead of print. PMID: 42228568.
