杂志名称：Biomedicine & Pharmacotherapy 影响因子：7.5 第一作者：Yeong-In Yang, Yi-Yue Wang 通讯作者：Jung-Hye Choi 作者单位：首尔庆熙大学药学院 本实验所用产品：AAH-CYT-3，RayBiotech，可同时检测42种微量功能细胞因子 实验样品类型：卵巢癌细胞系（SKOV3、OVCAR3）及其紫杉醇耐药亚系（SKOV3TR、OVCAR3TR）的条件培养基（CM） 研究摘要 卵巢癌（Ovarian Cancer, OC）是女性生殖系统中最致命的恶性肿瘤之一，其主要治疗手段为手术联合铂类及紫杉醇（paclitaxel）化疗。尽管初治反应率较高，但大多数患者最终因获得性耐药而复发，导致预后不佳。肿瘤微环境中的可溶性因子通过自分泌或旁分泌机制调控肿瘤细胞的耐药性。本研究旨在探讨紫杉醇耐药卵巢癌细胞中CCL2的异常表达及其通过自分泌信号和巨噬细胞招募诱导化疗耐药的分子机制。 研究结果 1. 耐药细胞条件培养基诱导化疗耐药 研究首先构建了紫杉醇耐药的SKOV3TRTR和OVCAR3TRTR卵巢癌细胞株。将亲本细胞暴露于耐药细胞的条件培养基（CM）后，紫杉醇的IC50显著升高，表明耐药细胞分泌的可溶性因子可诱导化疗耐受（图1A-B）。 2. CCL2/CCR2在耐药细胞中高表达 通过细胞因子抗体芯片（AAH-CYT-3，RayBiotech）筛选微量表达细胞因子，发现CCL2在两种耐药细胞CM中均显著高表达（图2A），ELISA验证其分泌水平升高。RT-PCR结果显示CCL2及其受体CCR2的mRNA水平在耐药细胞中均上调（图2B-D）。Kaplan-Meier生存分析显示，高表达CCL2的卵巢癌患者无进展生存期（PFS）显著较差（图2E）。 3. CCL2/CCR2轴介导紫杉醇耐药 使用CCL2 siRNA、CCL2中和抗体或CCR2抑制剂RS102895均可显著逆转由耐药细胞CM诱导的紫杉醇耐受。此外，外源性重组CCL2可直接提高紫杉醇IC50值（图3A-D），表明CCL2/CCR2轴在耐药形成中起关键作用。 4. CCL2通过PI3K/Akt和NF-κB通路诱导耐药 CCL2处理可剂量依赖性地激活Akt磷酸化，CCR2抑制剂可阻断该效应。PI3K/Akt抑制剂LY294002可逆转CCL2诱导的耐药。同时，NF-κB p65过表达可上调CCL2表达，而NF-κB抑制剂BAY 11-7082可降低CCL2分泌（图4A-F），说明CCL2通过NF-κB通路正反馈调控自身表达，并通过PI3K/Akt通路介导耐药。 5. CCL2招募巨噬细胞并诱导M2极化 Transwell迁移实验显示，耐药细胞及其CM显著促进THP-1来源巨噬细胞的迁移，该效应可被CCL2 siRNA、中和抗体或CCR2抑制剂阻断（图5A-E）。进一步发现，经耐药细胞CM刺激的巨噬细胞高表达M2标志物MR和Trem2，其CM亦可增强卵巢癌细胞对紫杉醇的耐受（图6A-B）。 6. CCR2抑制剂在体内增强紫杉醇敏感性 在ID8细胞诱导的卵巢癌小鼠模型中，联合使用RS102895与紫杉醇显著减少腹腔肿瘤结节数量，且未引起肝肾功能损伤（图7A-B），表明靶向CCL2/CCR2轴可安全有效地增强紫杉醇疗效。 研究结论 本研究首次系统揭示了CCL2/CCR2轴在卵巢癌紫杉醇耐药中的双重作用：一方面通过NF-κB/PI3K/Akt通路在肿瘤细胞中自分泌诱导耐药；另一方面通过招募并极化M2型肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）形成促耐药微环境。靶向CCL2/CCR2信号轴可能成为逆转卵巢癌化疗耐药的新策略。 技术亮点 在本研究中，抗体芯片技术用于比较亲本和紫杉醇耐药卵巢癌细胞条件培养基中42种细胞因子的表达谱。结果显示，CCL2在两种耐药细胞中均为上调最显著的因子，且ELISA和PCR进一步验证了其高表达。该发现为揭示CCL2/CCR2轴通过自分泌和巨噬细胞招募诱导化疗耐药提供了关键线索和起始依据。
文章题目：CCL2 overexpression is associated with paclitaxel resistance in ovarian cancer cells via autocrine signaling and macrophage recruitment（通过自分泌信号和巨噬细胞募集，CCL2过表达与卵巢癌细胞紫杉醇耐药相关）
