临床样本与动物模型证实，高树突状细胞浸润与黑色素瘤不良预后相关，伴随胆固醇合成与膜稳态通路异常激活。补充胆固醇会完全抵消DC疫苗联合抗PD1的疗效，而甲基β环糊精介导的胆固醇清除可显著抑制肿瘤生长，并升高瘤内CD8+效应T细胞与组织驻留记忆T细胞比例。

研究合成PDLLA - PPa - Co²⁺纳米载体，疏水包载胆固醇修饰CpG与甲基β环糊精，通过钴离子配位负载组氨酸标签抗原肽与穿膜肽TATk，获得一体化纳米疫苗NPCM - OT。Fig.1表明，纳米粒粒径130–150 nm、电位14至20 mV，甲基β环糊精包载率超80%，血清中72 h抗原保留率>50%。该系统实现树突状细胞高效摄取与溶酶体逃逸，为胞内抗原呈递与胆固醇调控提供结构基础。

图1 NPCM - OT的制备、表征、靶向作用及胆固醇耗竭效应

NPCM - OT可选择性降低树突状细胞膜胆固醇，提升膜刚度并优化免疫突触稳定性。处理后CD86 TCR共定位显著增加，ZAP70磷酸化水平上升；转录组与功能验证表明，纳米疫苗通过下调Myc/Klf2通路抑制胞葬作用，降低MerTK、整合素与CD36表达，解除对树突状细胞成熟与抗原呈递的抑制，实现T细胞强效活化。

图2 DC膜胆固醇的耗竭通过抑制胞吐作用增强APCs与T细胞之间的免疫突触形成

研究采用FDISCO组织透明化技术对完整引流淋巴结进行三维成像，无需切片即可实现全器官深度成像与荧光信号长效保留。NPCM - OT高效穿透被膜下CD169+巨噬细胞屏障，在淋巴结实质富集并优先靶向CD11c+树突状细胞；免疫荧光定量证实其显著提升树突状细胞成熟比例与膜胆固醇清除效率，为纳米疫苗体内递送提供直接三维结构证据。

图3 NPCM - OT浸润淋巴结及诱导免疫突触形成的评估

预防性模型中，NPCM - OT显著抑制B16OVA与B16肿瘤生长，60天生存率达90%。疫苗提升IFNγ+效应T细胞比例，增加CD103+记忆性CD8+ T细胞浸润，降低耗竭T细胞与调节性T细胞比例。单细胞测序显示，NPCM - OT下调CD63+免疫抑制性树突状细胞胆固醇代谢，驱动初始CD8+ T细胞向效应与记忆表型分化，强化淋巴结内免疫细胞通讯网络。

图4 NPCM - OT肿瘤预防能力及其作用机制的体内验证

在黑色素瘤肺转移与皮下肿瘤模型中，NPCM - TT（TRP-1 治疗抗原）联合抗PD1协同减少转移灶、抑制肿瘤生长。联合治疗可显著提升效应记忆CD8+ T细胞比例，增强抗原呈递与炎症信号通路。

图5 NPCM -OT肿瘤治疗能力及其作用机制的体内验证

人源化HLAA33:03胰腺癌模型中，个性化抗原纳米疫苗有效激活CD8+ T细胞并杀伤肿瘤细胞。

图6 在人源化HLA-A*33:03胰腺癌模型中对预测抗原肽纳米疫苗的验证

本研究首次建立膜胆固醇原位调控的抗肿瘤纳米疫苗新策略，通过一体化递送系统实现树突状细胞靶向、抗原呈递增强与免疫微环境重塑。借助组织透明化三维成像直观解析纳米疫苗在淋巴结内的完整转运与分布，突破传统二维成像局限。研究证实膜胆固醇调控可通过抑制胞葬作用强化免疫突触，为肿瘤纳米疫苗的设计与机制研究提供可转化的新方向。