从“能测”到“微量精准测”
单克隆抗体从头测序（De Novo Sequencing）：是在不依赖基因序列数据库的前提下，直接从蛋白质水平解析抗体一级结构的核心技术。
对于抗体研发和序列解析而言，珍贵/稀缺的微量样本的单抗测序一直是行业痛点。传统单抗从头测序流程对起始样品量要求很高，动辄需要几百甚至上千微克样品，常常因样品量不足无法完成测序，严重阻碍研发进度。
针对这一行业难题，百蓁生物团队对单克隆抗体从头测序全技术流程进行了系统性优化，实现技术重磅突破！如今仅需10 μg 以上起始样品量，即可完成单克隆抗体从头测序，实现抗体序列100%覆盖率和100%准确率，用硬核技术打破微量样品测序壁垒！
一、样品量为何是单抗测序最大阻碍？
基于质谱的单抗从头测序，需要借助多种蛋白酶（如 Trypsin、GluC 等）分别酶解获取互补肽段，再通过算法拼接得到完整轻重链序列。 传统方案中，每一种蛋白酶独立酶解都需要足量蛋白，整体样品消耗量居高不下，这对于珍贵或稀缺样品的单抗从头测序极不友好，因此，降低样品用量、坚守测序品质，成为单抗测序技术升级的核心方向。
二、四大维度全面优化，打造微量测序专属方案
百蓁生物团队围绕从头测序全技术流程深度打磨，多维度协同优化，兼顾低上样量与高测序质量：
1. 蛋白酶酶解方案精简与组合优化
筛选覆盖度最优的蛋白酶组合，在保证肽段互补性的同时减少酶解体系数量。每种蛋白酶的起始蛋白量优化至3 μg左右，多酶联合总投入量低至 10 μg。
2. 变性还原烷基化条件优化
针对低样品量体系，对变性剂浓度、还原剂用量和烷基化试剂用量进行精细调整，确保二硫键充分还原，避免非特异性修饰影响肽段识别率。
3. 酶解体系微量化与样品富集
开发了适合微量体系的酶解方案，优化酶与底物比例（E:S）、反应温度和时间，最大限度提高酶解效率；结合 C18 固相萃取（SPE）富集策略，有效提升低浓度样品的肽段上机量与信噪比。
4. LC-MS/MS 进样与数据采集参数优化
针对低上样量样品，进一步优化色谱梯度、进样量及质谱数据采集策略，提升质谱信号强度和谱图质量，为后续 De Novo 算法提供高质量的输入数据。
三、权威验证：阿达木单抗标准品实测，品质拉满
本次优化方案利用阿达木单抗（Adalimumab）作为质控，进行全流程验证。作为全球经典全人源 IgG1 单抗，其公开序列是方法学验证的黄金标准。
实验设计概要
样品来源：市售阿达木单抗参考品（IgG1，κ 轻链，重链约 50 kDa，轻链约 23 kDa）
前处理方案：采用优化后的多酶正交酶解流程，总投入量 10 μg（约 3 μg/每种蛋白酶）
仪器平台：Orbitrap Eclipse 超高分辨率质谱仪，多碎裂模式（HCD/EThcD）
数据分析：PEAKS® AB 全自动 De Novo 测序软件，结合人工核验
实验结果对比
结果显示：在样品量大幅缩减的前提下（10 μg 起始样品量），轻链与重链序列覆盖率均达到 100%，与公开参考序列比对准确率 100%，CDR 1-3 区域全部正确解析，I/L 区分置信度高。优化后的从头测序技术方案在显著降低样品消耗的同时，完整保留了测序质量。
四、六大核心服务优势，赋能抗体全研发周期
1. 样品用量行业领/先
总样品量低至 10 μg，单酶解仅需 约3 μg，完美适配各类微量稀缺样品。
2. 测序质量双重保障
100%序列覆盖率、100%序列准确率，结果真实可信。
3. 全流程智能解析
PEAKS® AB 软件驱动，搭配资深技术团队人工复核，杜绝误差。
4. 顶/级硬件平台支撑
搭载 Orbitrap Eclipse高端质谱仪，HCD / EThcD 多碎裂模式采集，数据稳定性强。
5. 一站式闭环服务
从前处理、质谱检测、序列分析到正式报告交付，全程专人对接，省心高效。
6. 周期短
最快3天交付正式报告。
五、适用场景
◆ 杂交瘤来源单克隆抗体，上清或腹水制备，蛋白量有限
◆ 从临床血清 / 血浆中亲和纯化的特异性抗体
◆ 早期抗体发现阶段的候选克隆，尚未规模化制备
◆ 存档参考品或历史样品，无法补充来源
◆ 抗体-药物偶联物（ADC）或经化学修饰抗体的序列确认
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来源：生物器材网
