最近经常刷到老一辈种菜没轻没重梗，我笑着笑着就哭了，浇水施肥往死里怼，白菜大到猪都得撑死，而我则是在羡慕这种粗放式成功。
回头看自己的实验，目标蛋白大量流穿挂不住、镍离子异常渗漏、纯化条带杂乱、重复性一次不如一次……但真不是我没轻没重操作粗放，先听听我狡辩：
DTT/EDTA 加过量，真不仅是因为手抖
我们都知道 DTT/EDTA 会影响 Ni 柱，但实际操作中，样本上清里的还原剂残留、配方换算误差、移液枪的误差、还有时候为了保险多加点的心态……都会让实际浓度轻松突破 Ni 柱的耐受极限，导致蛋白挂不住、漏镍污染下游实验。
缓冲液 pH 处理的差不多，偏差却在偷偷放大
日常配液时我们都习惯近似调节，小幅 pH 偏差觉得无伤大雅，但缓冲液配制温度差异、试剂批次偏差、仪器轻微漂移，都会默默的放大 pH 误差，结果经常时好时坏。
强行用高浓度变性剂，也不是因为任性
为了溶解难溶的包涵体蛋白，8M 尿素、6M 盐酸胍是我们绕不开的选择，但很多填料耐受能力有限，高强度变性环境会逐步破坏配位结构，削弱结合稳定性，想完成实验就要承受柱子性能受损、纯化回收率大打折扣的代价。
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很多时候我们一天需要处理十几个样本，裂解、离心、上样、洗脱连轴转，不可能每一步都反复核对浓度、校准 pH，这些【没轻没重】的操作，也是效率和结果的妥协。而我们的实验翻车，很多时候是因为传统 Ni 柱的【容错率】太低了，不用再迁就柱子也能做出稳定的好结果，点击下方链接即可申请德国 Cube INDIGO His 填料试用，名额有限，先到先得。
点击图片，申请试用
与传统 Ni-NTA 比较，Ni-INDIGO 在耐还原剂、耐螯合剂、宽 pH 耐受、高变性剂兼容、镍离子低渗漏、长期使用稳定性上全面升级，容错率太太提高：
耐受 20 mM EDTA/DTT
结合载量提升至 100 mg/ml
镍离子泄漏量减少至少 30 倍
再生无需剥离及装镍
蛋白纯度更高
在变性条件下稳定性提高 3 倍
His 标签蛋白纯化的亲和力与特异性，会随配体偶联的金属离子不同而变化：铜的亲和力最高，但特异性最低；钴则亲和力低、特异性高；镍是最常用的金属离子，能在亲和力与特异性之间达到良好平衡。Cube 提供 Ni/Cu/Co/Zn-NTA 纯化填料，覆盖不同亲和力与特异性需求，助你精准匹配实验条件。
➤ INDIGO vs 传统 NTA，优势一目了然：
➤ 现身说法：INDIGO vs NTA，DTT + EDTA 条件下高下立判
我们在同一条件下对比了 INDIGO 和传统 NTA 填料的纯化表现：
实验条件：含 20 mM DTT + 20 mM EDTA 的洗脱缓冲液
图：两张图从左到右分别为 INDIGO、NTA 填料、流穿液/洗脱液中含有 20 mM DTT 与 20 mM EDTA 的 INDIGO 与 NTA 填料，黄色为 eGFP 荧光蛋白
结果：
INDIGO：可耐受 20 mM DTT + 20 mM EDTA ，绝大部分 eGFP 能被洗脱下来，溶液呈黄色
传统 NTA：不耐受 20 mM DTT + 20 mM EDTA ，镍离子脱落，与 eGFP 无法结合，溶液呈无色
产品列表
Cube Biotech 研发团队在蛋白表达、纯化和结晶等方向拥有丰富经验。通过运用前沿科学技术，提供系列产品支持膜蛋白纯化和稳定研究，产品线包括膜蛋白稳定共聚物、亲和层析填料、无细胞表达裂解物、纳米盘支架蛋白等。
内容策划：邹礼平
内容审核：李琳
题图来源：图虫创意
